Nixtiequ niksbu żewġ sistemi mikroskopiċi komplementari biex inwettqu osservazzjonijiet fuq iċ-ċelloli ħajjin, li jippermettu eżamijiet fiżjoloġiċi. Is-sistema confocal laser scanning (CLSM) tipprovdi opportunitajiet eċċellenti għal manipulazzjonijiet u kejl fluworexxenti (fotoattivazzjoni, fotokonverżjoni, photobleaching, trasferiment ta’ enerġija reżonanti Förster (FRET)); l-ispeċifiċità tar-reġistrazzjoni tas-sinjal tiżdied b’detezzjoni spettrali. F’din is-sistema, nistgħu niffukaw it-testijiet fuq ir-reġjuni ż-żgħar fi ħdan il-kamp viżiv, magħżula b’mod fakultattiv. Bid-diska għażil (SD) sistema mikroskopika, nistgħu jirreġistraw proċessi molekulari fiċ-ċelloli ħajjin saħansitra aktar mgħaġġla mis-sistema CLSM, anke b’rata ta ‘reġistrazzjoni ta’ immaġni millisekondi, fil-kamp kollu tal-viżjoni. Aspett importanti huwa li ċ-ċelloli ħajjin huma soġġetti għal inqas espożizzjoni għad-dawl matul ir-reġistrazzjonijiet, għalhekk nistgħu nkomplu l-osservazzjonijiet ħafna itwal. Is-sistema SD li għandha tiġi akkwistata hija adattata wkoll għall-wiri ta’ proċessi molekulari fil-viċinanza immedjata tas-superfiċje taċ-ċellula (f’distanza ta’ 100–150 nm) b’riżoluzzjoni miżjuda u b’veloċità għolja meta mqabbla mat-testijiet CLSM (TIRF, jiġifieri mikroskopija ta’ riflessjoni interna sħiħa). Iż-żewġ sistemi huma kapaċi jirreġistraw żewġ sinjali fluworexxenti simultanjament ma’ 2 ditekters (CLSM) u 2 kameras (SDs), sabiex l-interazzjonijiet molekulari, il-bidliet fil-konċentrazzjoni u l-proċessi tat-trasport fiċ-ċelloli ħajjin jiġu speċifikament intraċċati f’ħin reali. L-14-il tim ta’ riċerka li pparteċipaw fis-sejħa għall-offerti qed jinvestigaw l-effetti fiżjoloġiċi molekulari u taċ-ċelloli ta’ mard infjammatorju u awtoimmuni li jaffettwa l-formazzjoni tat-tumur u l-metastasi, il-proċessi ċellulari tal-plastiċità nervuża u l-awtodiġestjoni taċ-ċelloli (ara l-bijografiji mehmuża). L-objettivi huma wesgħin, iżda l-karatteristika komuni tagħhom hija li għandhom l-għan li jesploraw bidliet bijoloġiċi dinamiċi taċ-ċelloli fiċ-ċelloli ħajjin. Il-mikroskopji li għandhom jiġu akkwistati jipprovdu l-kundizzjonijiet infrastrutturali meħtieġa għall-istudji, u l-isfond xjentifiku pendenti tal-parteċipanti jipprovdi l-pjattaforma ta’ għarfien meħtieġa għall-implimentazzjoni. Hawn taħt, it-tekniki mikroskopiċi li għandhom jintużaw huma ppreżentati permezz ta’ ftit temi ewlenin. 1. F’diversi ċelloli immuni (eż. granuloċiti, makrofaġi, ċelluli dendritiċi, limfoċiti) proċessi wara t-twaħħil ta’ ligand tar-riċetturi, “djalogu” bejn ir-riċetturi għandhom rwol kruċjali f’ħafna proċessi immuni fiżjoloġiċi u patoloġiċi. Pereżempju, kooperazzjoni bejn ir-riċetturi komplementari u r-riċetturi li jagħrfu l-mudell għal granuloċiti importanti fl-infjammazzjoni, li twassal għall-formazzjoni ta’ nases ekstraċellulari tan-newtrofili (l-hekk imsejħa NETs). Bidliet fis-sinjal Ca2+ intraċellulari li jakkumpanja l-attivazzjoni tan-newtrofili jistgħu jiġu ttestjati bl-użu ta’ indikaturi fluworexxenti tal-indikatur Ca (eż. Fluo3/Fluo4) u indikaturi Ca2+ kodifikati ġenetikament (eż. GCaMP6) kemm fuq sistemi CLSM kif ukoll fuq sistemi SD għal linji ta’ ċelloli li kapaċi jiffurmaw NET. Il-mikroskopija TIRF integrata fl-SD hija essenzjali għall-monitoraġġ tal-adeżjoni u t-tixrid ta’ diversi ċelloli u proċessi immuni ħdejn il-wiċċ taċ-ċellola (eż. rilaxx NET). Bl-użu ta’ sistemi CLSM u SD, billi niskopru żewġ sinjali fluworexxenti simultanjament, nistgħu nittestjaw l-effetti molekulari li jikkontrollaw il-funzjonament taċ-ċelloli immuni (eż. interazzjoni bejn ir-riċetturi, proċessi ta’ trasport intraċellulari) f’ħin reali, qrib ħafna tal-wiċċ taċ-ċellola u b’mod parallel mal-kejl tal-attivazzjoni. 2. Ir-rikombinazzjoni omologa hija waħda mill-aktar modi effettivi ta’ korrezzjoni tal-iżbalji fid-DNA tal-organiżmi, il-prevenzjoni tat-trasformazzjoni tal-kanċer u l-ħolqien ta’ varjanti ġodda tal-ġeni. Minbarra l-approċċ in vitro, aħna nittestjaw f’organiżmi sħaħ (dud u żebra) DNA-HELICAS li fihom sottoproċessi tad-diviżjoni taċ-ċelloli, li permezz tagħhom attivitajiet molekulari u li magħhom l-imsieħba tal-proteini jippromwovu rikombinazzjoni kkontrollata, segregazzjoni kromosomali preċiża. Il-mikroskopji li jippermettu l-wiri simultanju u rapidu taż-żewġ sinjali fluworexxenti huma essenzjali biex jinstabu proċessi f’organiżmi li jipproduċu proteini li huma involuti f’mekkaniżmi ta’ korrezzjoni tal-iżbalji b’tikketti fluworexxenti differenti. L-analiżi b’sistemi CLSM u SD għalhekk tikkumplimenta l-kejl imwettaq bis-sistema mikroskopika b’żewġ ritratti li diġà teżisti. 3. F’dawn l-aħħar snin, bl-iżvilupp tat-teknoloġija tatwaġġ molekulari, ksibna riżultati rivoluzzjonarji fil-qasam tal-optofarmacology. Bl-iżvilupp ta’ derivattivi farmaċewtiċi li jistgħu jiġu attivati b’mod ħafif, għandna l-opportunità li nirregolaw ċerti proċessi bijoloġiċi taċ-ċelloli fis-sistema CLSM billi nillokalizzaw ċerti mikrometri. Il-proċessi li jikkontrollaw it-trasformazzjoni dinami...