Α) Τονίζουμε ότι οι συμμετέχοντες στο διαγωνισμό έθεσαν τους στόχους πριν από δύο χρόνια, εργάζονται μαζί σε αυτά τα σχέδια σε καθημερινή βάση, και μπορούν να παράγουν μια σειρά από ενθαρρυντικά προκαταρκτικά αποτελέσματα. Λόγω της έλλειψης πόρων, τα αποτελέσματα αυτά δεν είναι συστηματικά: έχουμε δουλέψει με λίγα ενεργά μόρια, λίγα παθογόνα, και in vivo δοκιμές λείπουν. Μια επιτυχής εφαρμογή θα καλύψει αυτό το κενό. Το πρόγραμμα εργασίας μας περιλαμβάνει δύο υποπρογράμματα, τα οποία παρουσιάζουμε, στα οποία περιγράφονται τα προκαταρκτικά αποτελέσματα, τα σχέδια και τα αναμενόμενα ρηξικέλευθα αποτελέσματα. Υποπρόγραμμα 1 1.1 Έλεγχος στελεχών ανθεκτικών στα αντιβιοτικά κατά των AMPs (Pál), πλήρης προσδιορισμός αλληλουχίας του γονιδιώματος (Kondorosi) και βιοπληροφορική ανάλυση αποτελεσμάτων (Papp) 1.2 AMP — αντιβιοτικοί συνδυασμοί χαμηλού μορίου (Pál, Papp) 1.3 Σύνθεση νέων δομικών στοιχείων για μιμητικά πτυσσόμενα AMP (Fülöp), εναλλαγή και καθαρισμός αλληλουχιών (Martinek, Tóth) και Βιοφυσικού Χαρακτηρισμού (Martinek) 1.4 Δοκιμή μιμητικών πτυσσόμενων AMP in vitro και in vivo (Pál, Kondorosi) και Δοκιμές Τοξικότητας (Földesi) 2 υποπρόγραμμα 2.1 Παραγωγή αναλόγων SSB-C foldamer (Martins), σταθεροποίηση με πλαϊνή αλυσίδα (Tóth), σύνθεση των απαιτούμενων μονομερών (Fülöp) και in vitro δοκιμές αναστολής PPI. 2.2 SSB-C Mymetics — Δομικός Χαρακτηρισμός της Αλληλεπίδρασης Reco-WH (Martinek) 2.3 SSB-C Αναλογικές Βελτιστοποίηση Δυναμικής Συνδυαστικής Μεθόδου Βιβλιοθήκης. Μελέτες κυτταρικής διείσδυσης (Martin) 2.4 Σε πραγματικό χρόνο in vitro εξελικτικές μελέτες, αντιβακτηριακές δοκιμές (Pál, Papp), μελέτες τοξικότητας (Göldesi). Β) 1. ΥΠΟΈΡΓΟ: Τα αντιμικροβιακά πεπτίδια AMPs είναι μικρά πεπτίδια με αποκλίνουσα δομή και λειτουργία που προστατεύουν τον ξενιστή από διάφορες μικροβιακές λοιμώξεις. Βρίσκονται σε φυτά, ζώα, μύκητες και αποτελούν μέρος ενός πρωτογενούς συστήματος προστασίας από παθογόνους παράγοντες. [Φύση 2002, 415, 389] Παρόλο που παρέμειναν αποτελεσματικά στην εξέλιξη, η πρακτική εφαρμογή τους δημιουργεί ορισμένα προβλήματα, δύο από τα οποία επικεντρώνονται στα εξής: 1) Επί του παρόντος, υπάρχει σοβαρή συζήτηση σχετικά με την ανάπτυξη της ανθεκτικότητας έναντι αυτών των μορίων και, εάν ναι, ποιες επιβλαβείς παρενέργειες μπορεί να έχει. [FEMS Microbiol Lett 2012, 330, 81] 2) Ένα περαιτέρω πρόβλημα πριν από την κλινική χρήση των πεπτιδίων είναι ότι μερικές φορές είναι δύσκολο να χορηγηθούν και να απορροφηθούν και μπορεί να υποβαθμιστούν από ανθρώπινα πρωτεϊνικά ένζυμα (πρωτεάση). Η σταθερότητα in vivo συχνά δεν είναι ικανοποιητική. Οι προκαταρκτικές έρευνές μας δείχνουν ότι αυτά τα προβλήματα μπορούν να ξεπεραστούν. Επιπλέον, τα AMPs είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικά κατά των πολυανθεκτικών βακτηρίων. Για να γίνει αυτό, είναι απαραίτητο να επιλέξετε AMP κατά των οποίων δεν παρατηρείται αντίσταση. Τα μόρια αυτά αποτελούν τη βάση για περαιτέρω ανάπτυξη: διατηρώντας τις παραπάνω ευνοϊκές δομικές και λειτουργικές ιδιότητες, σχεδιάζουμε τα λεγόμενα μόρια πεπτιδομιμητικής πτυσσόμενης. Στόχος μας είναι να καταδείξουμε ότι ο συνδυασμός αυτών των πεπτιδομιμητικών με αντιβιοτικά είναι εξαιρετικά αποτελεσματικός στην καταπολέμηση της αντίστασης. Προκαταρκτικά αποτελέσματα και σχέδια: Η Αχιλλέα πτέρνα των πολυανθεκτικών βακτηρίων μπορεί να επιτεθεί από AMPs. Λεπτομερείς γενετικές, βιοχημικές, φαινολιπικές δοκιμές και δοκιμές έκφρασης γονιδιώματος των ομάδων με επικεφαλής τους Csaba Pál, Balázs Papp και Éva Kondorosi επιβεβαίωσαν ότι η δομή της μεμβράνης, η ακαμψία και η πρωτεϊνική σύνθεση των ανθεκτικών βακτηρίων συχνά αλλάζουν σημαντικά. [NAT Commun 2014, 5, 4352· Mol Syst Biol 2013, 9, 700] Δεδομένου ότι ο κύριος στόχος της AMP είναι η βακτηριακή μεμβράνη, έχει προταθεί ότι η αντοχή στα αντιβιοτικά επηρεάζει επίσης την ευαισθησία σε AMP. Το αποτέλεσμα ήταν απροσδόκητο και πολύ ενδιαφέρον. Το 90 % των πολυανθεκτικών στελεχών έχουν γίνει υπερευαισθησία σε πολλαπλά AMPs: σε σύγκριση με τα αρχικά στελέχη-μάρτυρες, η ευαισθησία αυτών των στελεχών γενικά αυξήθηκε κατά δύο έως τρεις φορές. Αυτό δείχνει ότι υπάρχει σοβαρό κόστος ανάπτυξης ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά, το οποίο μπορεί δυνητικά να αξιοποιηθεί με τη συγχορήγηση αντιβιοτικών και ΑΦΜ. Αποτελεσματική θεραπεία συνδυασμού αντιβιοτικών AMP. Στο επόμενο βήμα, οι εταίροι επικεντρώνονται σε δύο βασικά ζητήματα. Υπάρχουν AMP που συγχορηγούνται με αντιβιοτικά α) αναστέλλουν την αντίσταση in vitro και β) σκοτώνουν αποτελεσματικά τα πολυανθεκτικά βακτήρια. Οι μελέτες τους επικεντρώνονται σε δύο AMP: το πεπτίδιο NCR335 και η οικογένεια πεπτιδίων selfinine σε PGLA. Και για τα δύο πεπτίδια, 90-100 % των πολυανθεκτικών στελεχών παρέμειναν ιδιαίτερα ευαίσθητα σε αυτά. Προκαταρκτικά αποτελέσματα: α) Τα ανθεκτικά βακτήρια Tetracycline και σιπροφλοξασίνης έχουν γίνει πιο ευαίσθητα σε αυτούς τους παράγοντες με την προσθήκη PGLA στο αντιβιοτικό. Ο αντίκτυπος είναι δραματικός σε αρκετές περιπτώσεις: η ευαισθησία στα αντιβιοτικά αυξάνεται 10-50 φορές με πολύ χαμηλή (υποαναστολή) δόσ...