A) Subliniem că participanții la licitație și-au stabilit obiectivele cu mult în urmă cu doi ani, lucrează zilnic la aceste planuri și pot produce o serie de rezultate preliminare încurajatoare. Din cauza deficitului de resurse, aceste rezultate nu sunt sistematice: am lucrat cu câteva molecule active, puțini agenți patogeni, și testele in vivo lipsesc. O cerere reușită ar acoperi această lacună. Planul nostru de lucru are două subprograme, pe care le prezentăm, care prezintă rezultatele preliminare, planurile și rezultatele revoluționare preconizate. Subprogramul 1 1.1 Testarea tulpinilor rezistente la antibiotice împotriva AMP (Pál), secvențierea completă a genomului (Kondorosi) și analiza bioinformatică a rezultatelor (Papp) 1.2 AMP – combinații de antibiotice cu molecule mici (Pál, Papp) 1.3 Sinteza noilor blocuri de construcție pentru pliantele mimetice AMP (Fülöp); comutarea și purificarea secvențelor (Martinek, Tóth) și Caracterizarea Biofizică (Martinek) 1.4 Testarea pliantelor AMP mimetice in vitro și in vivo (Pál, Kondorosi) și Testele de toxicitate (Földesi) 2 subprogramul 2.1 Producția de analogi SSB-C foldamer (Martins), stabilizarea prin legătura laterală (Tóth), sinteza monomerilor necesari (Fülöp) și testarea in vitro pentru inhibarea PPI. 2.2 SSB-C Mymetics – Caracterizarea structurală a interacțiunii Reco-WH (Martinek) 2.3 Analogi SSB-C optimizând metoda bibliotecii dinamice covalente. Studii de penetrare celulară (Martin) 2.4 Studii evolutive in vitro în timp real, teste antibacteriene (Pál, Papp), studii de toxicitate (Göldesi). B) SUBPROIECT: Peptidele antimicrobiene AMP sunt peptide scurte, cu o structură și o funcție divergente care protejează gazda împotriva diferitelor infecții microbiene. Acestea se găsesc în plante, animale, ciuperci și fac parte dintr-un sistem primar de protecție împotriva agenților patogeni. [Nature 2002, 415, 389] Deși au rămas eficiente în evoluție, aplicarea lor practică ridică o serie de probleme, dintre care două sunt concentrate pe: 1) În prezent, există o dezbatere serioasă despre dezvoltarea rezilienței împotriva acestor molecule și, dacă da, despre efectele secundare dăunătoare pe care le poate avea. [FEMS Microbiol Lett 2012, 330, 81] 2) O altă problemă înainte de utilizarea clinică a peptidelor este că acestea sunt uneori dificil de administrat și de absorbit și pot fi degradate de enzimele umane care diminuează proteinele (proteaze). Stabilitatea lor in vivo este adesea nesatisfăcătoare. Investigațiile noastre preliminare arată că aceste probleme pot fi depășite. În plus, AMP sunt deosebit de eficiente împotriva bacteriilor multirezistente. Pentru a face acest lucru, este necesar să se selecteze AMP împotriva cărora rezistența nu este observată. Aceste molecule reprezintă baza pentru dezvoltarea ulterioară: păstrând proprietățile structurale și funcționale favorabile de mai sus, proiectăm așa-numitele molecule pliabile peptidomimetice. Scopul nostru este de a demonstra că combinația acestor peptidomimetice cu antibiotice este extrem de eficientă în combaterea rezistenței. Rezultate preliminare și planuri: Călcâiul Ahile al bacteriilor multirezistente la medicamente poate fi atacat de AMP. Testele detaliate genetice, biochimice, fenotipuse și testele de exprimare la nivel de genom ale grupurilor conduse de Csaba Pál, Balázs Papp și Éva Kondorosi au confirmat că structura membranei, rigiditatea și compoziția proteinelor membranare a bacteriilor rezistente s-au schimbat adesea semnificativ. [NAT Commun 2014, 5, 4352; Mol Syst Biol 2013, 9, 700] Deoarece majoritatea țintei primare a AMP este membrana bacteriană, s-a sugerat că rezistența la antibiotice afectează, de asemenea, sensibilitatea la AMP. Rezultatul a fost neașteptat și foarte interesant. 90 % din tulpinile multirezistente au devenit hipersensibile la mai multe AMP-uri: comparativ cu tulpinile martor inițiale, sensibilitatea acestor tulpini a crescut, în general, de două până la trei ori. Acest lucru arată că există un cost serios de dezvoltare a rezistenței la antibiotice, care poate fi exploatată prin administrarea concomitentă de antibiotice și AMP. Terapie eficientă cu antibiotice AMP. În etapa următoare, partenerii se concentrează asupra a două aspecte-cheie. Există orice AMP care sunt administrate concomitent cu antibiotice (a) inhibă rezistența la novo in vitro și (b) distrug în mod eficient bacteriile multirezistente. Studiile lor se concentrează asupra a două planuri de management de mediu: peptida NCR335 și familia de peptide selfinine la PGLA. Pentru ambele peptide, 90-100 % din tulpinile multirezistente au rămas foarte sensibile la acestea. Rezultate preliminare: a) bacteriile rezistente la tetraciclină și ciprofloxacină au devenit mai sensibile la acești agenți prin adăugarea PGLA la antibiotic. Impactul este dramatic în mai multe cazuri: sensibilitatea la antibiotice crește de 10-50 ori cu o doză foarte mică (subinhibitorie) de PGLA.
