Ressaltamos que os participantes do concurso estabeleceram as metas abundantemente há dois anos, trabalham juntos nesses planos diariamente e podem produzir uma série de resultados preliminares encorajadores. Devido à escassez de recursos, estes resultados não são sistemáticos: Trabalhámos com poucas moléculas activas, poucos agentes patogénicos e faltam testes in vivo. Uma candidatura bem sucedida preencheria esta lacuna. O nosso plano de trabalho tem dois subprogramas, que apresentamos, descrevendo os resultados preliminares, os planos e os resultados esperados. Sub-programme 1 1.1 Testing of antibiotic resistant strains against AMPs (Pál), complete genome sequencing (Kondorosi) and bioinformatics analysis of results (Papp) 1.2 AMP — low-molecule antibiotic combinations (Pál, Papp) 1.3 Synthesis of new building blocks for AMP mimetic foldamers (Fülöp), switching and purification of sequences (Martinek, Tóth), and Biophysical Characterisation (Martinek) 1.4 Testing of AMP mimetic foldamers in vitro and in vivo (Pál, Kondorosi) and Toxicity Tests (Földesi) 2 sub-programme 2.1 Production of SSB-C foldamer analogues (Martins), stabilisation by side chain bridging (Tóth), synthesis of required monomers (Fülöp) and in vitro testing for PPI inhibition. 2.2 SSB-C Mymetics — Structural Characterisation of Reco-WH Interaction (Martinek) 2.3 SSB-C Analogs Optimising Dynamic Covalent Library Method (não traduzido para português). Estudos de penetração celular (Martin) 2.4 Estudos evolutivos in vitro em tempo real, ensaios antibacterianos (Pál, Papp), estudos de toxicidade (Göldesi). B) 1. SUBPROJETO: Os peptídeos antimicrobianos AMPs são peptídeos curtos com uma estrutura e função divergentes que protegem o hospedeiro contra várias infecções microbianas. Encontram-se em plantas, animais, fungos e fazem parte de um sistema primário de proteção contra patógenos. [Natureza 2002, 415, 389] Embora tenham permanecido eficazes na evolução, a sua aplicação prática levanta uma série de problemas, dois dos quais se concentram em: 1) Presentemente, há um debate sério sobre a revelação da resiliência contra estas moléculas e, se assim for, que efeitos secundários prejudiciais pode ter. [FEMS Microbiol Lett 2012, 330, 81] 2) Outro problema antes da utilização clínica dos péptidos é que estes são por vezes difíceis de administrar e absorver e podem ser degradados por enzimas humanas que empobrecem as proteínas (proteases). A sua estabilidade in vivo é muitas vezes insatisfatória. As nossas investigações preliminares mostram que estes problemas podem ser superados. Além disso, os AMPs são particularmente eficazes contra bactérias multirresistentes. Para fazer isso, é necessário selecionar AMPs contra os quais a resistência não é observada. Estas moléculas são a base para o desenvolvimento futuro: ao mesmo tempo que mantemos as propriedades estruturais e funcionais favoráveis acima referidas, concebemos as chamadas moléculas peptidomiméticas de dobragem. O nosso objetivo é demonstrar que a combinação destes peptidomiméticos com antibióticos é excecionalmente eficaz no combate à resistência. Resultados e planos preliminares: O calcanhar de Aquiles de bactérias multirresistentes pode ser atacado por AMPs. Testes genéticos, bioquímicos, fenotipus detalhados e testes de expressão ao nível do genoma dos grupos liderados por Csaba Pál, Balázs Papp e Éva Kondorosi confirmaram que a estrutura da membrana, a rigidez e a composição proteica da membrana de bactérias resistentes muitas vezes mudaram significativamente. [NAT Commun 2014, 5, 4352; Mol Syst Biol 2013, 9, 700] Uma vez que o alvo principal da AMP é a membrana bacteriana, foi sugerido que a resistência aos antibióticos também afeta a suscetibilidade à AMP. O resultado foi inesperado e muito interessante. 90 % das estirpes multirresistentes tornaram-se hipersensíveis a múltiplos AMP: em comparação com as estirpes de controlo basais, a sensibilidade destas estirpes aumentou geralmente duas a três vezes. Isto mostra que há um custo sério de desenvolver a resistência antibiótica, que pode potencial ser explorada pela co-administração dos antibióticos e dos AMPs. Terapia de combinação antibiótica AMP eficaz. Na etapa seguinte, os parceiros concentram-se em duas questões-chave. Existem quaisquer AMP que sejam coadministrados com antibióticos (a) inibem a resistência de novo in vitro e (b) matam eficazmente as bactérias multirresistentes? Os seus estudos centram-se em dois PMA: o peptide NCR335 e a família do peptide do selfinine ao PGLA. Para ambos os péptidos, 90-100 % das estirpes multirresistentes permaneceram altamente sensíveis a eles. Resultados preliminares: a) As bactérias resistentes à tetraciclina e à ciprofloxacina tornaram-se mais sensíveis a estes agentes pela adição de PGLA ao antibiótico. O impacto é dramático em vários casos: A suscetibilidade aos antibióticos aumenta 10 a 50 vezes com uma dose muito baixa (subinibitória) de PGLA.
