Avec ce projet, suite à d’autres précédents, l’objectif est d’identifier de nouvelles mutations dans les gènes de l’ADNmt et de caractériser le mécanisme pathogène dans des modèles de cybrides transmitochochondriales qui contiennent un fond nucléaire de neuroblastome, qui peut être différencié dans les neurones, et avec des cellules souches mésenchymiques adultes humaines, qui peuvent être différenciées dans le muscle, puisque les neurones et les muscles sont les tissus les plus touchés dans les maladies mitochondriales. Les maladies mitochondriales sont une série de troubles, avec des manifestations cliniques très diverses, qui ont en commun qu’elles sont produites par des défauts dans la biosynthèse de l’énergie cellulaire sous forme d’ATP. Le diagnostic des patients atteints de ces pathologies est médiocre et leur traitement est très limité ou inexistant. L’ADN mitochondrial est parfaitement caractérisé et a été associé à un grand nombre de mutations ponctuelles et de délétions qui causent ces maladies. Cependant, seulement 16 % des patients ont atteint le diagnostic génétique, laissant le reste non diagnostiqué. Objectif: Séquencez l’ADN mitochondrial complet (16,569 pb) d’échantillons de notre banque d’ADN de patients atteints d’une maladie mitochondriale, afin de trouver de nouvelles mutations qui causent la pathologie. En outre, le mécanisme pathogène de ces mutations sera étudié par l’utilisation de cybrides transmitochondriales de lignées cellulaires neurones et de myocytes. Méthodologie: Séquençage des génomes mitochondriaux complets. Le mécanisme d’étude de la pathogénicité doit être réalisé par la construction de cybrides transmitochochondriales contenant de l’ADNmt muté. Ils effectueront des analyses de différents paramètres liés à la fonction mitochondriale: croissance du galactose, activité de la chaîne respiratoire, production de ROS, viabilité cellulaire, potentiel membranaire interne mitochondrial, niveaux de calcium, niveaux d’ATP et synthèse, et analyse de la synthèse de l’ARN et des protéines.
