A) Me rõhutame, et hankes osalejad seadsid eesmärgid rikkalikult kaks aastat tagasi, nad töötavad nende plaanide kallal igapäevaselt ja suudavad anda mitmeid julgustavaid esialgseid tulemusi. Ressursside nappuse tõttu ei ole need tulemused süstemaatilised: me oleme töötanud väheste aktiivsete molekulidega, väheste patogeenidega ja in vivo testid puuduvad. Edukas taotlus täidaks selle lünga. Meie töökaval on kaks allprogrammi, mille esitame, milles kirjeldatakse esialgseid tulemusi, plaane ja oodatavaid läbimurdelisi tulemusi. Allprogramm 1 1.1 Antibiootikumidele resistentsete tüvede testimine AMP (Pál), täielik genoomi sekveneerimise (Kondorosi) ja bioinformaatika tulemuste analüüs (Papp) 1.2 AMP – madala molekulaarsete antibiootikumide kombinatsioonid (Pál, Papp) 1.3 AMP mimeetikumide (Fülöp) uute ehitusplokkide süntees, järjestuste (Martinek, Tóth) ja biofüüsikaliste omaduste (Martinek) vahetamine ja puhastamine (Martinek) 1.4 AMP mimetic foldamers’i testimine in vitro ja in vivo (Pál, Kondorosi) ja toksilisuse testid (Földesi) 2 allprogramm 2.1 SSB-C foldamer analoogide tootmine (Martins), stabiliseerimine külgahela kaudu (Tóth), vajalike monomeeride süntees (Fülöp) ja in vitro katsed PPI inhibeerimise suhtes. 2.2 SSB-C Mymetics – Reco-WH koostoime struktuuriline iseloomustus (Martinek) 2.3 SSB-C analoogid Dünaamilise kovalentse raamatukogu meetodi optimeerimine. Rakkude läbitungimise uuringud (Martin) 2.4 Reaalajas in vitro evolutsiooniuuringud, antibakteriaalsed katsed (Pál, Papp), toksilisuse uuringud (Göldesi). B) 1. ALLPROJEKT: Antimikroobsed peptiidid AMPd on lühikesed peptiidid, millel on erinev struktuur ja funktsioon, mis kaitsevad peremeesorganismi mitmesuguste mikroobsete infektsioonide eest. Neid leidub taimedes, loomades, seentes ja on osa esmasest kaitsesüsteemist patogeenide eest. [Loodus 2002, 415, 389] Kuigi need on jätkuvalt tõhusad, tekitab nende praktiline kohaldamine mitmeid probleeme, millest kaks on keskendunud järgmisele: 1) Praegu on tõsine arutelu nende molekulide vastupanuvõime arendamise üle ja kui jah, siis millised kahjulikud kõrvaltoimed võivad sellel olla. [FEMS Microbiol Lett 2012, 330, 81] 2) Veel üks probleem enne peptiidide kliinilist kasutamist on see, et neid on mõnikord raske manustada ja imenduda ning inimvalku kahandavad ensüümid (proteaasid) võivad neid lagundada. Nende in vivo stabiilsus on sageli mitterahuldav. Meie esialgsed uurimised näitavad, et neid probleeme on võimalik lahendada. Lisaks on AMPd eriti tõhusad multiresistentsete bakterite vastu. Selleks on vaja valida AMPd, mille vastu resistentsust ei täheldata. Need molekulid on edasise arengu aluseks: säilitades ülaltoodud soodsad struktuurilised ja funktsionaalsed omadused, kujundame niinimetatud peptidomimeetilised voldikumolekulid. Meie eesmärk on näidata, et nende peptidomimeetika ja antibiootikumide kombinatsioon on resistentsuse vastu võitlemisel erakordselt tõhus. Esialgsed tulemused ja kavad: AMPd võivad rünnata multiresistentsete bakterite Achilleuse kand. Csaba Páli, Balázs Pappi ja Éva Kondorosi juhitud rühmade üksikasjalikud geneetilised, biokeemilised, fenotipustestid ja genoomitaseme ekspressiooni testid kinnitasid, et resistentsete bakterite membraanstruktuur, jäikus ja membraanvalgu koostis on sageli oluliselt muutunud. [NAT-komisjon 2014, 5, 4352; Mol Syst Biol 2013, 9, 700] Kuna enamik AMP peamine sihtmärk on bakteriaalne membraan, on soovitatud, et antibiootikumiresistentsus mõjutab ka tundlikkust AMP suhtes. Tulemus oli ootamatu ja väga huvitav. 90 % multiresistentsetest tüvedest on muutunud ülitundlikkuseks mitme AMP suhtes: võrreldes ravieelsete kontrolltüvedega suurenes nende tüvede tundlikkus üldjuhul kaks kuni kolm korda. See näitab, et antibiootikumiresistentsuse tekkimisega kaasnevad tõsised kulud, mida on võimalik ära kasutada antibiootikumide ja AMPde koosmanustamisel. Efektiivne AMP antibiootikumide kombinatsioonravi. Järgmises etapis keskenduvad partnerid kahele põhiküsimusele. Kas on mingeid AMPsid, mida manustatakse koos antibiootikumidega (a) inhibeerib de novo resistentsust in vitro ja b) hävitab tõhusalt multiresistentsed bakterid. Nende uuringutes keskendutakse kahele juhtimiskavale: NCR335 peptiid ja iseinine peptiidide perekond PGLA. Mõlema peptiidi puhul oli 90–100 % multiresistentsetest tüvedest nende suhtes väga tundlik. Esialgsed tulemused: a) Tetratsükliin ja tsiprofloksatsiiniresistentsed bakterid on muutunud nende ainete suhtes tundlikumaks, lisades antibiootikumile PGLA. Mõju on dramaatiline mitmel juhul: antibiootikumide tundlikkus suureneb 10–50 korda koos väga väikese (subinhibioorse) PGLA annusega.
