A) Vi betonar att deltagarna i anbudsförfarandet satte upp målen för mycket för två år sedan, de arbetar tillsammans med dessa planer dagligen och kan ge ett antal uppmuntrande preliminära resultat. På grund av bristen på resurser är dessa resultat inte systematiska: vi har jobbat med få aktiva molekyler, få patogener och in vivo-tester saknas. En framgångsrik ansökan skulle fylla denna lucka. Vår arbetsplan har två delprogram, som vi presenterar, som beskriver de preliminära resultaten, planerna och de förväntade genombrottsresultaten. Delprogram 1 1.1 Testning av antibiotikaresistenta stammar mot AMP (Pál), fullständig genomsekvensering (Kondorosi) och bioinformatikanalys av resultat (Papp) 1.2 AMP – kombinationer av lågmolekylära antibiotika (Pál, Papp) 1.3 Syntes av nya byggstenar för AMP:s mimetiska vikmaskiner (Fülöp), omkoppling och rening av sekvenser (Martinek, Tóth). och biofysisk karakterisering (Martinek) 1.4 Testning av AMP-mimetic foldamers in vitro och in vivo (Pál, Kondorosi) och Toxicity Tests (Földesi) 2 delprogram 2.1 Produktion av SSB-C foldameranaloger (Martins), stabilisering genom sidokedjebryggning (Tóth), syntes av erforderliga monomerer (Fülöp) och in vitro-test för PPI-hämning. 2.2 SSB-C Mymetics – Strukturell karakterisering av Reco-WH-interaktion (Martinek) 2.3 SSB-C Analoger Optimering Dynamic Covalent Library Method. Cellpenetrationsstudier (Martin) 2.4 Utvecklingsstudier i realtid in vitro, antibakteriell testning (Pál, Papp), toxicitetsstudier (Göldesi). B) 1. DELPROJEKT: Antimikrobiella peptider AMP är korta peptider med en divergerande struktur och funktion som skyddar värden mot olika mikrobiella infektioner. De finns i växter, djur, svampar och ingår i ett primärt system för skydd mot patogener. [Natur 2002, 415, 389] Även om de har förblivit effektiva i utvecklingen, ger deras praktiska tillämpning upphov till ett antal problem, varav två är koncentrerade på: 1) För närvarande finns det en allvarlig debatt om utvecklingen av motståndskraft mot dessa molekyler och, om så är fallet, vilka skadliga biverkningar det kan ha. [FEMS Microbiol Lett 2012, 330, 81] 2) Ett ytterligare problem före klinisk användning av peptider är att de ibland är svåra att administrera och absorbera och kan brytas ned av humana proteinnedbrytande enzymer (proteaser). Deras stabilitet in vivo är ofta otillfredsställande. Våra preliminära undersökningar visar att dessa problem kan lösas. AMP är dessutom särskilt effektiva mot multiresistenta bakterier. För att göra detta är det nödvändigt att välja AMP mot vilka motstånd inte observeras. Dessa molekyler utgör grunden för vidareutveckling: samtidigt som vi behåller ovanstående gynnsamma strukturella och funktionella egenskaper designar vi så kallade peptidomimetic foldamer molekyler. Vårt mål är att visa att kombinationen av dessa peptidomimetika och antibiotika är exceptionellt effektiv i kampen mot resistens. Preliminära resultat och planer: Achilles hälen av multiresistenta bakterier kan angripas av AMP. Detaljerade genetiska, biokemiska, fenotipustester och uttryckstester på genomnivå av de grupper som leds av Csaba Pál, Balázs Papp och Éva Kondorosi bekräftade att membranstrukturen, styvheten och membranproteinsammansättningen hos resistenta bakterier ofta förändrades avsevärt. [NAT Commun 2014, 5, 4352; Mol Syst Biol 2013, 9, 700] Eftersom de flesta AMP:s primära mål är bakteriemembranet, har det föreslagits att antibiotikaresistens också påverkar känsligheten för AMP. Resultatet blev oväntat och mycket intressant. 90 % av de multiresistenta stammarna har blivit överkänsliga mot flera AMP: jämfört med kontrollstammarna vid baslinjen ökade känsligheten hos dessa stammar i allmänhet med två till tre gånger. Detta visar att det finns en allvarlig kostnad för att utveckla antibiotikaresistens, som potentiellt kan utnyttjas genom samtidig administrering av antibiotika och AMP. Effektiv kombinationsbehandling med AMP-antibiotikum. I nästa steg fokuserar partnerna på två nyckelfrågor. Finns det några AMP som administreras samtidigt med antibiotika (a) hämmar de novo-resistens in vitro och b) effektivt dödar multiresistenta bakterier. Deras studier är inriktade på två förvaltningsplaner: NCR335-peptiden och den självininiska peptidfamiljen till PGLA. För båda peptiderna förblev 90–100 % av multiresistenta stammar mycket känsliga för dem. Preliminära resultat: a) Tetracyklin och ciprofloxacinresistenta bakterier har blivit mer känsliga för dessa medel genom att tillsätta PGLA till antibiotikan. Effekterna är dramatiska i flera fall: antibiotikakänsligheten ökar 10–50 gånger med en mycket låg (subinhibitory) PGLA-dos.
